pA-Tn5轉座酶是通過將ProteinA與Tn5轉座酶進行融合來構建的。ProteinA是一種來源于金黃色葡萄球菌的蛋白質,它具有高親和力結合大多數哺乳動物IgG抗體的Fc片段的能力。Tn5轉座酶是一種能夠識別特定DNA序列并在基因組上進行“剪切-粘貼”或“復制-粘貼”的酶。融合ProteinA的目的是為了在實驗中實現對特定蛋白質的靶向。下面是pA-Tn5轉座酶融合的一般步驟:1.**基因克隆**:首先,將Tn5轉座酶的基因和ProteinA的基因克隆到一個表達載體中。這通常涉及到分子克隆技術,如PCR擴增、限制性內切酶消化和連接酶連接。2.**融合蛋白設計**:設計一個融合蛋白,其中ProteinA的基因序列和Tn5轉座酶的基因序列通過一個短的連接肽(LinkerPeptide)相連。這個連接肽通常包含幾個氨基酸殘基,以確保兩個蛋白部分在融合后仍能保持各自的構象和功能。3.**表達載體構建**:將融合基因插入到適合的表達載體中,這個載體應該包含適當的啟動子、標記基因(如抗性基因)和終止子,以確保融合蛋白在宿主細胞中得到高效表達。4.**宿主細胞表達**:將構建好的表達載體轉化到宿主細胞(如大腸桿菌)中,通過誘導表達融合蛋白。泛素化是一種蛋白質翻譯后修飾過程,涉及將泛素分子共價結合到靶蛋白上。這個過程由一系列酶促反應組成。Recombinant Human HVEM/TNFRSF14 Protein,hFc Tag
dITP(脫氧肌苷三磷酸)在PCR(聚合酶鏈反應)擴增中的應用是特定和有限的。以下是dITP在PCR擴增中的一些關鍵點:1.**PCR擴增中的使用**:dITP可以在某些類型的PCR中替代部分dGTP,特別是在使用某些特殊的DNA聚合酶時,例如那些不具有校正(proofreading)功能的酶。2.**替代比例**:在PCR中,dITP通常不能完全替代dGTP,因為這樣做可能會抑制PCR擴增反應。通常推薦在PCR反應中使用10%的dITP來代替dGTP。3.**特殊DNA聚合酶**:某些高保真DNA聚合酶,如碧云天生產的Q6U?高保真DNA聚合酶,可以與dITP一起使用,以提高PCR擴增的特異性和效率。4.**dNTP/dITP混合物**:在一些PCR應用中,會使用dNTP/dITP混合物,其中包含2.5mM每種dNTP加上0.25mM的dITP,以優化擴增條件。5.**PCR反應條件**:dITP的使用可能需要優化PCR反應條件,包括退火溫度、Mg2+濃度和循環次數。6.**穩定性和儲存**:dITP溶液應儲存在-20°C或更低的溫度下,以保持其穩定性。使用時應避免多次凍融,以防止降解。7.**安全性和專業性**:dITP和其他PCR組分應由專業人員用于科研目的,不應在臨床診斷中使用。Recombinant Human ENPP-3 (558-875) Protein,His TagSpCas9-NLS的N端和C端都融合了SV40 T抗原的核定位信號,這使得Cas9蛋白與gRNA形成的復合物。
磁珠法質粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米分離技術和細菌細胞的SDS堿裂解法從菌體中提取高質量質粒DNA的實驗工具。以下是一些關于磁珠法質粒小量抽提試劑盒的關鍵信息:1.**操作簡便性**:-操作快速簡單,可以在60分鐘內完成96個不同樣品的提取,實現質粒提取的高通量化和自動化。2.**高純度和高產量**:-抽提得到的質粒純度高,OD260/OD280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/OD230比值大于2.0,可以直接用于轉化、DNA測序、PCR和酶切等后續實驗。3.**試劑盒組件**:-包含BufferMP1、BufferMP2、BufferMP3、PureMagBeads、BufferMPB、TEBuffer(pH8.0)、RNaseA等組分。4.**應用范圍**:-適用于從大腸桿菌中抽提小量質粒,所得質粒可直接用于細胞轉染、DNA測序、PCR等實驗。5.**效率和純度**:-與同類產品相比,提取效率更高,獲得質粒的純度更高;與柱式法相比,可減少離心次數,獲得完整性更好的質粒。6.**注意事項**:-例如,SgMagBeads需要充分洗滌和干燥,以保證無乙醇殘留,并且在吸取上清時避免吸入SgMagBeads。7.**保存條件**:-室溫保存,有效期一年。磁珠長期不使用時,可以4℃保存以延長保存時間。
5'DNA腺苷酰化試劑盒中使用的酶通常被稱為腺苷酰化酶(Adenylase),這種酶能夠催化5'端磷酸化的單鏈DNA或RNA(pDNA或pRNA)轉換成5'端腺苷酰化DNA或RNA(AppDNA或AppRNA)。根據搜索結果,該酶的來源是嗜熱古細菌,在大腸桿菌中進行表達并純化而獲得。這種酶在反應中將ATP分解成AMP和PPi,然后將AMP轉移到單鏈DNA的5'磷酸基團上,形成腺苷酰化單鏈DNA,從而制備出腺苷酰化接頭(linker)。此外,一些5'DNA腺苷酰化試劑盒中使用的酶是MthRNA連接酶(例如NEB#M2611A),這種酶也用于生成高產量的5'腺苷酰化DNA,并且操作簡便,具有超過95%的效率,無需凝膠純化即可完成單步反應。MthRNA連接酶是一種已知能夠在65℃下有效工作的酶,有助于避免DNA的二級結構對腺苷酰化反應的干擾。這些酶的高效率和特異性使得5'DNA腺苷酰化試劑盒在單鏈DNA的5'端腺苷酰化修飾中非常有效,常用于miRNA等3'端為羥基的RNA或單鏈DNA在克隆、高通量測序建庫或PCR檢測等應用中。來源于Francisella tularensis:FnCas12a是一種來源于Francisella tularensis菌株的核酸內切酶。
PCR產物直接進行電泳分析通常涉及以下步驟:PCR擴增:首先使用PCR Master Mix和特定的引物對目標DNA片段進行擴增。PCR產物的準備:如果使用的是含有預混凝膠加載染料的PCR Master Mix(如某些Blood Direct PCR Master Mix),則PCR產物在擴增后已經含有了適合電泳的染料。如果沒有使用含染料的Master Mix,則需要在PCR反應完成后向產物中添加適量的凝膠加載染料。電泳槽的準備:清潔電泳槽,確保沒有灰塵或殘留物。安裝電泳板和梳子,注意密封以防緩沖液泄漏。灌注緩沖液:向電泳槽中灌注適量的電泳緩沖液,常用的緩沖液有1X TAE或1X TBE。PCR產物的加載:將PCR產物輕輕混合均勻,避免氣泡的產生。使用移液槍或微量移液管將PCR產物加入到凝膠孔中。如果PCR Master Mix中已含有染料,通常不需要額外添加。電泳條件的設置:根據PCR產物的大小和凝膠的濃度選擇合適的電壓和時間進行電泳。例如,較小的DNA片段可能需要較高的電壓,而較大的片段則可能需要較低的電壓和更長的時間。通過測序或基于PCR的方法(如T7E1酶切和測序)來驗證gRNA的編輯效率,篩選出效率高的gRNA序列 。Recombinant Mouse BST2 Protein,His Tag
全長A2aR蛋白可應用于免疫、ELISA、SPR(表面等離子共振)、BLI(生物層干涉)和細胞實驗等場景。Recombinant Human HVEM/TNFRSF14 Protein,hFc Tag
dGTPSolution(脫氧鳥苷三磷酸溶液)在分子克隆中扮演著重要角色,主要應用包括但不限于以下幾個方面:1.**DNA合成**:dGTP作為DNA聚合酶的底物之一,在分子克隆中用于合成新的DNA鏈,特別是在PCR擴增和cDNA合成中。2.**PCR擴增**:在常規PCR和高保真PCR中,dGTP提供必要的核苷酸,以確保目標DNA片段的準確復制。3.**cDNA合成**:在從mRNA模板合成cDNA的過程中,dGTP是合成互補DNA鏈的關鍵成分。4.**DNA測序**:dGTP也用于Sanger測序等DNA測序技術中,幫助合成測序反應中的DNA鏈。5.**質粒構建**:在質粒或其他載體的構建過程中,dGTP可能用于填補缺口或連接DNA片段。6.**引物延伸**:在引物延伸反應中,dGTP用于延伸引物,以合成完整的DNA鏈。7.**DNA標記**:dGTP可以用于DNA片段的標記,便于后續的克隆和檢測。dGTPSolution通常以100mM的濃度提供,以便于在實驗中根據需要進行稀釋。在使用時,應確保產品具有高純度、無DNase和RNase污染,以保證實驗的準確性和重復性。此外,dGTPSolution應儲存在-20°C的條件下,避免反復凍融,以保持其穩定性。Recombinant Human HVEM/TNFRSF14 Protein,hFc Tag
Probe qPCR Mix (2×, UDG Plus):高效防污染的探針法qPCR解決方案Probe qPCR Mix (2×, UDG Plus) 是一種為探針法實時熒光定量PCR(qPCR)設計的即用型預混液,結合了熱啟動Taq DNA聚合酶、優化的反應緩沖液、dUTP和UDG酶,能夠有效防止PCR產物污染,提高檢測的特異性和準確性。產品特點高特異性和靈敏度:采用抗體修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶,結合優化的反應緩沖液,有效減少非特異性擴增,提高檢測靈敏度。防污染設計:預混液中包含UDG酶和dUTP,可在反應前降解含尿嘧啶的PCR產物,防止氣溶膠污染。多重檢測能力:支持多重qPCR反...