實時熒光定量 PCR 儀(qPCR 儀)憑借其能夠在 PCR 擴增過程中實時監(jiān)測熒光信號變化,從而實現(xiàn)對目的基因精細定量的特點,在多個領域都有較廣且重要的應用。qPCR的高靈敏度使其能對微量生物樣本(如血液、毛發(fā)、唾液、精斑等)進行檢測,在個體識別、親子鑒定等方面發(fā)揮重要作用。個體識別:通過擴增樣本中特異性的短串聯(lián)重復序列(STR)并定量分析,與已知樣本比對,實現(xiàn)個體的精細識別,廣泛應用于刑事案件偵破和災難事故中的身份確認。親子鑒定:基于親代與子代基因序列的遺傳規(guī)律,通過定量分析特定基因標記的匹配程度,確定親子關系,結果準確性可達99.99%以上。RePure-T三槽儀器采用了多重保護機制,有效防止過熱和其他潛在的故障。無錫普通基因擴增儀PCR儀代理商
功能拓展與兼容性:適配實驗流程:1. 附加功能熒光檢測模塊:若需定量分析(如基因表達量、病原體載量),需選擇 qPCR 儀,內置熒光通道(如 FAM、VIC、ROX 等),支持實時監(jiān)測擴增曲線。自動化接口:**機型可對接機器人工作站,實現(xiàn) “樣本提取 - 體系配置 - PCR - 產物分析” 全流程自動化,適合高通量測序前處理。2. 試劑與耗材兼容性支持不同品牌試劑(如 Taq 酶、高保真酶、PCR Mix)及耗材(0.2mL 管、半裙邊 / 全裙邊 96 孔板),避免因耗材不匹配導致密封性差或加熱效率低。南京QPCR基因擴增儀PCR儀一般多少錢柏恒RePure系列PCR儀進行PCR擴增,能夠獲得高質量的擴增產物,確保實驗結果的可靠性和準確性。
反應體系配制與加樣體系配制:按比例在離心管中混合各組分(先加非模板試劑,***加模板,避免污染),輕輕混勻(勿劇烈震蕩),短暫離心(1000-2000 rpm,10-20 秒)使液體沉底。示例(20μL 體系):qPCR Mix 10μL + 上游引物(10μM)0.8μL + 下游引物(10μM)0.8μL + 模板 2μL + 無菌水 6.4μL(探針法需額外加探針)。加樣:將配制好的體系逐一加入 96 孔板的對應孔中,避免產生氣泡(若有氣泡,用吸頭刺破)。加樣后用封板膜密封(確保無褶皺、無漏液),短暫離心(500-1000 rpm,30 秒),使液體聚集在孔底,避免掛壁。
瓊脂糖凝膠電泳檢測:PCR 擴增結束后,取適量的擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳。在電場作用下,DNA 根據(jù)大小在凝膠中遷移,經過染色后,在紫外燈下觀察是否出現(xiàn)特異性條帶。若出現(xiàn)與預期大小相符的條帶,則初步判斷為轉基因成分陽性;若未出現(xiàn)條帶,則為陰性。熒光定量 PCR 分析:若采用熒光定量 PCR 技術,可根據(jù)熒光信號的變化實時監(jiān)測 PCR 擴增過程。通過標準曲線法或相對定量法,計算出樣本中轉基因成分的含量。一般以 Ct 值(循環(huán)閾值)來表示熒光信號達到設定閾值時的 PCR 循環(huán)數(shù),Ct 值與模板 DNA 的起始量呈負相關,通過與標準品的 Ct 值比較,可得出樣本中轉基因成分的相對含量。測序驗證:對于瓊脂糖凝膠電泳檢測為陽性的樣本,為進一步確認結果的準確性,可將擴增產物進行測序。將測序結果與已知的轉基因序列進行比對,若序列一致,則可確定樣本中含有相應的轉基因成分。RePure-(D)B可通過遠程監(jiān)控和數(shù)據(jù)傳輸功能,隨時隨地查看實驗進展和數(shù)據(jù)變化。
實驗效率與合規(guī)性:1. 程序編輯與數(shù)據(jù)管理操作界面是否支持觸摸屏或電腦端遠程控制,能否存儲自定義程序(如保存不同實驗的溫度循環(huán)參數(shù));數(shù)據(jù)導出功能:是否支持 PDF、Excel 格式報告生成,便于實驗記錄和合規(guī)審計(如臨床檢測需符合 GMP 標準)。2. 安全與合規(guī)性臨床用 PCR 儀需具備醫(yī)療器械注冊證(如 NMPA 認證),科研用儀器需符合 CE、FDA 等國際標準;部分機型內置熱蓋(105℃),防止冷凝水影響反應體系,避免產物污染。選型決策流程明確**需求:先確定 “是否需要梯度功能”“樣本通量多大”“是否需定量”;技術參數(shù)對標:重點關注溫控精度、均勻性、升降溫速率;成本與場景匹配:科研選梯度 + 低通量,臨床選高通量 + 合規(guī)機型,野外選便攜 + 集成化;品牌與服務驗證:參考用戶評價,對比售后響應速度與培訓支持。RePure-(D)B梯度功能進行PCR反應可以有效地優(yōu)化實驗條件,提高反應的特異性和效率,得到更可靠的實驗結果。無錫QPCR基因擴增儀PCR儀代理商
靈活的溫度設置,使得RePure-A特別適合于復雜樣本的檢測與多重靶標的擴增。無錫普通基因擴增儀PCR儀代理商
PCR 儀的維護與注意事項:日常維護:定期清潔反應模塊,去除殘留試劑(如礦物油、PCR 產物),避免污染。校準溫度:使用標準溫度計驗證控溫精度,每年至少 1 次。操作注意:配置反應體系時需在冰上進行,防止引物或酶提前活化。避免頻繁開關儀器,減少溫控模塊損耗。實驗后及時進行模塊消毒(如用 75% 乙醇擦拭),防止交叉污染。PCR 儀的發(fā)展趨勢:便攜化與集成化:微流控芯片 PCR 儀將反應體系微型化,可實現(xiàn) “樣本進 - 結果出” 的即時檢測(如 POCT 設備)。高通量與自動化:結合機器人工作站,實現(xiàn)從樣本提取到 PCR 擴增的全流程自動化,適用于大規(guī)模篩查。多功能整合:如與測序儀聯(lián)用,實現(xiàn) “擴增 - 測序” 一體化,縮短基因分析周期。無錫普通基因擴增儀PCR儀代理商