用SNAP i.d.o 2.0系統(tǒng) 系統(tǒng)設(shè)置 1.將SNAP i.d.9 2.0底座放在水平工作臺(tái)上。2.通過(guò)推動(dòng)管道末端的聯(lián)接插件,將真空管道連接至系統(tǒng)背面。插入系統(tǒng)基座背面的快速斷開(kāi)接頭,直至其滑動(dòng)。注意:要斷開(kāi)管路連接,請(qǐng)用食指將管路連接器下方的卡舌向上推,然后將其拉出。管出來(lái)。3.將管道的另一端連接到真空源。使用一升的真空燒瓶作為疏水閥和一個(gè)Millex-FA。過(guò)濾器(目錄號(hào)SLFA05010)可保護(hù)真空源不受污染,如下所示。注意:任何可以產(chǎn)生410毫巴(12 inHg)和34 L / min的真空源就足夠了。如果是真空如果源的工作溫度高于410毫巴,則SNAP i.d.2.0系統(tǒng)將自動(dòng)調(diào)節(jié)真空度壓力。如果真空源不足,則流經(jīng)系統(tǒng)的流量可能會(huì)不一致,從而導(dǎo)致更長(zhǎng)的時(shí)間。處理時(shí)間和/或抗上海益啟生物樣本制備儀訂購(gòu)方便。黃浦區(qū)Merck細(xì)胞跨膜電阻儀Merck儀器咨詢問(wèn)價(jià)
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P i.d.o 2.0SNAP i.d. @ 2.0多印跡框架迷你相框中框阻塞溶液量每孔15毫升30毫升30毫升抗體量每孔2.5 mL5毫升10毫升洗滌緩沖液*量每孔4x 15 mL每個(gè)4x 30 mL每個(gè)4x 30 mL●Tris或磷酸鹽緩沖鹽溶液,補(bǔ)充有0.1%Tweene 20表面活性劑在計(jì)算免疫檢測(cè)所需的抗體量時(shí),三個(gè)要素對(duì)于成功檢測(cè)出蛋白質(zhì)并獲得了高質(zhì)量的印跡(低背景,高信號(hào)):●樣品類型和凝膠上樣濃度●一級(jí)和二級(jí)抗體濃度●檢測(cè)試劑的種類和靈敏度下表中的所有抗體均使用LuminataTM Forte化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑進(jìn)行了測(cè)試。對(duì)于SNAP i.d. @ 2.0系統(tǒng),抗體濃度高于標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)中的濃度,但濃度較低體積。 表3.標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)中一抗稀釋的實(shí)例 SNAPi.d.?2.0免疫檢
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15分鐘。圖4.擴(kuò)展孵化(過(guò)夜):SNAP i.d.8 2.0系統(tǒng)與標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)一種。 SNAP id.o 2.0蛋白檢測(cè)b。標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)Midi印跡免疫檢測(cè)將A431細(xì)胞裂解液和大鼠肝裂解液(12至3 ug)轉(zhuǎn)移至Immobilon9-P膜。兩種印跡均用在TBST中制備的0.5%NFDM封閉。這SNAP i.d.c 2.0 Midi印跡被阻斷20秒,標(biāo)準(zhǔn)印跡為分鎖了1個(gè)小時(shí)。兩種印跡均與相同稀釋度的MAP激酶1/2(ErK1 / 2),但是,對(duì)于HRP偶聯(lián)的二抗山羊抗兔(AP132P),將SNAP i.d.2.0印跡孵育10分鐘在TBST中洗滌3次后,將標(biāo)準(zhǔn)印跡孵育1小時(shí)。 圖5.擴(kuò)展孵化(1小時(shí)):,SNAP i.d.o 2.0系統(tǒng)1小時(shí)協(xié)議與SNAP i.d.9 2.0系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議與標(biāo)準(zhǔn)免黃浦區(qū)Merck細(xì)胞跨膜電阻儀Merck儀器咨詢問(wèn)價(jià)
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