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取上述200μL細胞液加入小室，下室（培養板）加入900L含有10% FBS的培養基。不同規格的小室和培養板所加的體積不同，具體參考Millicell?產品說明書。37°C孵育24至72小時，依據**細胞類型而定。孵育結束，小心取出細胞小室，吸掉小室上層培養液，PBS清洗一遍，70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min，0.5%結晶紫（2%乙醇或PBS溶解）染色20min，然后進行第8步或者第9步。PBS清洗兩次以去除多余的染料，立即用棉簽擦去濾膜上層的細胞，自然靜置風干。顯微鏡下觀察濾膜下層的細胞，隨機選取不同的視野計數并算平均值。結晶紫溶解濾膜下層細胞，然后用33%醋酸脫色，將結晶紫完全洗脫下來，洗脫液可在酶標儀上570nm讀取OD值。這種方法可以避免視野下細胞穿透不均勻帶來的誤差。

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