T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因編輯中的應用主要體現在突變體檢測和基因編輯效率評估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具體應用步驟和特點:1.**基因編輯效率評估**:-T7EI用于評估CRISPR-Cas9在給定的導向RNA靶位點上對細胞群體進行基因編輯的效率。-通過PCR擴增圍繞CRISPR導向RNA靶位點的基因組DNA,如果CRISPR-Cas9介導的非同源末端連接(NHEJ)修復事件引入了突變,變性和退火將形成突變型和野生型PCR擴增子的異源雙鏈DNA。2.**突變體檢測**:-如果CRISPR/Cas9編輯成功在DNA上引入突變,則可與野生型DNA片段退火產生異質雙鏈DNA。T7EI可以識別該DNA上的不完全配對的DNA位點然后進行雙鏈切割,通過瓊脂糖凝膠電泳即可顯示酶切后的條帶,從而半定量判定基因編輯效果。-T7EI能識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導致的錯配DNA,不能識別1bp的插入、缺失或突變。3.**實驗步驟**:-收集細胞并提取基因組DNA,然后使用PCR擴增期望編輯的基因組區域。擴增子的長度建議為0.5-1kb。-對擴增的DNA進行變性和退火復性,以產生異質雙鏈DNA。-使用T7EI酶處理退火后的DNA產物,在37℃孵育15分鐘。
蛋白A-微球菌核酸酶(pA-MNase)是一種特殊的融合蛋白,它結合了蛋白A和微球菌核酸酶(MNase,MicrococcalNuclease)的特性。以下是pA-MNase的一些關鍵特點和應用:1.**融合表達產物**:pA-MNase是蛋白A與微球菌核酸酶MNase的融合表達產物,因此它同時具有ProteinA的抗體結合活性和MNase的核酸內切酶活性。2.**雙重功能**:由于其雙重功能,pA-MNase常用于蛋白質-DNA相互作用研究,特別是在ChIC(ChromatinImmunocleavage)和CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)技術中。3.**ProteinA的特性**:ProteinA是一種發現于金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的細胞壁表面蛋白,分子量為42kDa,能特異性地與哺乳動物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)結合,通常結合部位為免疫球蛋白的Fc區。4.**微球菌核酸酶(MNase)的特性**:MNase是一種核酸內切酶,能夠降解核酸,常用于降解蛋白質制備中存在的核酸,減少細胞裂解液的粘度,以及用于染色質結構分析和快速RNA測序。5.**反應條件**:MNase的反應條件包括1XMicrococcalNucleaseReactionBuffer,需要補充100μg/ml重組白蛋白,分子生物學級,并在37°C下孵化。Recombinant Human TNFSF12 Protein,hFc Tag蛋白在表達過程中形成包涵體,需要通過復性步驟恢復其活性。這通常涉及物質的存在下進行蛋白質的重折疊。
DL200 DNA Marker:助力分子量分析的科研利器在分子生物學研究中,DNA Marker作為分子量標準,是瓊脂糖凝膠電泳中不可或缺的工具。DL200 DNA Marker憑借其的性能和獨特的設計,為科研人員提供了高效、可靠的分子量分析解決方案。分子量標準DL200 DNA Marker由特定分子量的雙鏈DNA片段組成,條帶大小準確,能夠為DNA片段的大小測定提供可靠的參照。其條帶清晰銳利,背景干凈,即使在低濃度下也能保持高辨識度,確保實驗結果的準確性。即用型設計,操作便捷該產品已預混1×Loading Buffer,無需額外處理,可直接上樣進行電泳。這種即用型設計簡化了實驗操作流程,節省了科研人員的時間和精力。穩定性高,不易降解DL200 DNA Marker采用獨特研發技術,穩定性好。在室溫下可穩定存放,不易出現條帶降解或彌散現象。即使在反復凍融的情況下,也能保持良好的性能,確保實驗結果的一致性。
pA-MNase(蛋白A-微球菌核酸酶)在以下實驗中特別有用:1.**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:這是一種用于研究蛋白質-DNA相互作用的技術,pA-MNase在此技術中用于在免疫沉淀后切割染色質DNA,以分析特定蛋白質與DNA的結合位點。2.**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:這是一種蛋白質-基因組互作研究技術,pA-MNase在此技術中用于在目標蛋白質被抗體識別后,通過核酸酶活性切割附近的DNA,從而釋放與目標蛋白質相互作用的DNA片段。CUT&RUN技術相比傳統的ChIP-Seq具有實驗周期短、信噪比高、可重復性好以及細胞投入量低的優勢,尤其適用于早期胚胎發育、干細胞、**以及表觀遺傳學等研究領域。3.**染色質免疫沉淀實驗**:pA-MNase在染色質免疫沉淀實驗中用于染色質片段化,它在核小體間DNAlinker上進行切割保持了核小體的完整性,并且由于其溫和的酶解條件,消除了超聲功率的可變性和超聲過程中染色質乳化所帶來的負面影響。4.**去除核酸污染**:pA-MNase也可用于去除細胞裂解液中的核酸,以減少樣品的粘度,這對于后續的蛋白質分析實驗尤為重要。
一、產品特點(一)高靈敏度Probe qPCR Mix (2×) 采用了先進的酶制劑配方,成分為經過優化的熱啟動Taq酶。這種酶在常溫下處于抑制狀態,只有在高溫條件下才被激發,從而有效避免了非特異性擴增的發生。其靈敏度極高,能夠準確檢測到低至單個拷貝的核酸靶標,即使在樣本中目標基因含量極低的情況下,也能輕松實現定量。例如,在對稀有細胞類型中的特定基因表達進行分析時,該試劑能夠快速且準確地檢測到目標基因的表達水平,為研究人員提供了可靠的實驗數據。(二)高特異性該qPCR Mix的特異性主要得益于其獨特的探針設計和優化的反應體系。它與熒光探針配合使用,通過探針與目標核酸序列的特異性結合來實現信號的檢測。這種探針檢測方式具有極高的特異性,能夠有效區分單個堿基的差異,從而避免了非特異性產物的干擾。在復雜的基因組背景下,即使存在高度同源的序列,該試劑也能準確地識別并擴增目標基因,確保實驗結果的準確性和可靠性。例如,在對病毒核酸進行檢測時,即使病毒基因與宿主基因存在部分序列相似性,該試劑仍能準確地檢測到病毒核酸,為病原體的快速診斷提供有力支持。由于Pfu DNA Polymerase 對引物的質量要求較高,使用純度高的引物可以減少由于引物錯誤導致的非目標突變。Recombinant Human VAP-1 Protein,His Tag
Pfu DNA Polymerase的長片段擴增能力:Pfu DNA Polymerase能夠高效擴增長片段DNA,適合復雜基因組研究。Recombinant Human TDGF1/Cripto Protein,His Tag
一、產品特點(一)高靈敏度該qPCR Mix采用了先進的熱啟動Taq酶技術,通過化學修飾將酶活性鎖定在低溫條件下,在PCR反應的高溫變性階段釋放活性。這一特性有效避免了非特異性擴增,顯著提高了反應的靈敏度,即使對于低豐度的靶基因,也能實現檢測。例如,在檢測稀有突變基因時,其高靈敏度能夠確保即使在野生型基因背景中含量極低的突變基因也能被準確識別,為病痛早期篩查等研究提供了有力支持。(二)高特異性其獨特的緩沖體系經過優化,能夠精確調控引物與模板的結合過程。在反應過程中,該體系可有效減少引物二聚體的形成,同時增強引物與目標模板的特異性結合能力。這使得在復雜的基因組背景下,目標基因得以高效擴增,從而顯著提高了qPCR反應的特異性。在多基因家族成員的區分檢測中,這種高特異性優勢尤為明顯,能夠避免因引物錯配導致的非目標基因擴增,確保實驗結果的準確性。Recombinant Human TDGF1/Cripto Protein,His Tag
Probe qPCR Mix (2×, UDG Plus):高效防污染的探針法qPCR解決方案Probe qPCR Mix (2×, UDG Plus) 是一種為探針法實時熒光定量PCR(qPCR)設計的即用型預混液,結合了熱啟動Taq DNA聚合酶、優化的反應緩沖液、dUTP和UDG酶,能夠有效防止PCR產物污染,提高檢測的特異性和準確性。產品特點高特異性和靈敏度:采用抗體修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶,結合優化的反應緩沖液,有效減少非特異性擴增,提高檢測靈敏度。防污染設計:預混液中包含UDG酶和dUTP,可在反應前降解含尿嘧啶的PCR產物,防止氣溶膠污染。多重檢測能力:支持多重qPCR反...