CUT&RUN和ChIC是兩種用于研究蛋白質-DNA相互作用的技術,它們有一些關鍵的區別:1.**技術原理**:-**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:ChIC技術利用抗體將感興趣的蛋白與ProteinA-MNase相結合來進行DNA切割。ChIC的優勢在于使用TF特異性抗體系住MNase,并只在結合位點裂解。-**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:CUT&RUN技術則是在核的輕微MNase處理后釋放單核小體和TF-DNA復合物,留下寡核小體。CUT&RUN通過在冰上進行簡短的消化反應,在TF結合的MNase擴散到周邊的基因組和裂解可接近的染色質之前在上清中恢復TF-DNA復合物。2.**操作步驟和簡便性**:-**ChIC**:ChIC可能需要甲醛固定操作,這可能重新引入了ChIP-seq的一些問題,如交聯導致的DNA和蛋白質的化學修飾。-**CUT&RUN**:CUT&RUN簡化了操作步驟,使用磁珠固定細胞核,適用于新鮮和冷凍組織樣本,縮短了生成DNA測序文庫的時間(1-2天)。3.**背景信號和信噪比**:-**ChIC**:ChIC產生的背景信號可能較高,因為它可能涉及到非特異性的DNA切割。
T5核酸外切酶在基因編輯中確實有應用,并且具有一些優勢:1.**提高編輯效率**:根據一篇研究文章,T5核酸外切酶可以與CRISPR/Cas系統共表達或融合,以提高基因編輯的效率。這種共表達或融合可以增加indel(插入和缺失)頻率,盡管增加的幅度可能不大。2.**增強基因編輯效果**:在另一項研究中,通過使用螺旋-螺旋二聚體肽(coiled-coilpeptides)將T5核酸外切酶招募到Cas9或Cas12a蛋白上,可以提高基因編輯的效率,這種方法被稱為CCExo(CRISPR-Coiled-coil-Exonuclease)。這種招募方式優于共表達和直接融合,其中強的親和力CC對顯示出高的突變頻率和刪除長度。3.**應用于多種細胞類型**:CCExo系統在多種細胞系和原代細胞中都能有效地提高基因失活效率,并且在慢性髓性白血病(CML)患者的原代細胞以及異種移植動物模型中展示了其應用潛力,這表明CCExo方法可能成為CML和其他遺傳性疾病的潛在選擇。T5核酸外切酶與CRISPR核酸酶蛋白進行融合,并引入了核定位信號(NLS)序列以構建表達載體,用于基因編輯。綜上所述,T5核酸外切酶在基因編輯中的應用可以增強編輯效率和效果,尤其是在與CRISPR/Cas系統結合使用時。Recombinant Cynomolgus IL-18BP Protein,His TagPhusion Master Mix (2×) 是一種即用型預混液包含dNTPs、Mg2?和優化的反應緩沖液加入模板和引物可進行反應。
一、靈敏度與特異性該試劑采用 SYBR Green I 熒光染料,這種染料能夠特異性地結合到雙鏈 DNA 上,當 DNA 在 PCR 過程中被擴增時,熒光信號也隨之增強。其靈敏度極高,即使在樣本中目標基因的初始拷貝數極低的情況下,也能準確地檢測到其擴增信號。同時,通過優化的反應體系,有效減少了非特異性擴增的產生,確保了實驗結果的特異性。例如,在對微量的病毒核酸進行檢測時,SYBR Green qPCR Mix (2×, High ROX, UDG Plus) 能夠識別并擴增目標病毒基因,避免了其他非病毒核酸的干擾,為病原體的早期診斷提供了有力支持。二、高濃度 ROX 參考染料,穩定可靠qPCR 實驗中,ROX 參考染料的作用不容小覷。SYBR Green qPCR Mix (2×, High ROX, UDG Plus) 中的高濃度 ROX 參考染料,能夠有效校正孔間熒光信號的差異,提高實驗結果的重復性和穩定性。在多孔板實驗中,不同孔之間的熒光信號可能會因儀器的微小差異、加樣量的不均勻等因素而產生波動。高濃度的 ROX 參考染料如同一把標尺,對這些波動進行校正,使得實驗數據更加準確可靠。無論是單次實驗還是大規模的樣本檢測,都能保證結果的一致性,為科研數據的統計分析提供了堅實基礎。
在分子生物學研究中,RNA的完整性和純度是影響實驗結果的重要因素。5×RNALoadingBuffer作為一種專為RNA非變性凝膠電泳設計的上樣緩沖液,憑借其獨特配方和性能,為RNA分析提供了可靠的工具。產品特點高效沉降與指示功能5×RNALoadingBuffer的主要成分包括甘油、EDTA、溴酚藍和二甲苯青。甘油的高密度特性能夠使RNA樣品在凝膠電泳中順利沉入加樣孔,而溴酚藍和二甲苯青則作為指示劑,幫助實時監測電泳進程。無RNase污染該緩沖液經過DEPC(焦碳酸二乙酯)處理,確保無RNase污染,從而有效保護RNA樣品免受降解,保證實驗結果的可靠性。優化的配方5×RNALoadingBuffer含有5mMEDTA,能夠螯合二價金屬離子,進一步防止RNA在電泳過程中被降解。操作簡便使用時只需將RNA樣品與1/4體積的5×RNALoadingBuffer混合,即可直接上樣電泳。這種簡便的操作流程提高了實驗效率。適用性該緩沖液適用于多種類型的RNA樣品,包括小分子RNA和長鏈RNA,且在非變性條件下能夠保持RNA的天然結構。穩定的保存條件5×RNALoadingBuffer在-20℃條件下可保存兩年,室溫運輸也不會影響其性能,這為實驗室的長期使用提供了便利。牛痘DNA拓撲異構酶I的反應溫度為37°C。在這個溫度下,酶的活性高,能夠有效地進行DNA的切割和連接。
高靈敏度與特異性該試劑盒采用優化的緩沖體系和新一代TaqDNA聚合酶,結合高效的逆轉錄酶,能夠在低濃度RNA樣本中實現高靈敏度的檢測。其特異性高,即使在復雜的樣本中,也能通過熔解曲線分析呈現單一峰,避免非特異性擴增。防污染設計OneStepRT-qPCRSYBRGreenKit(UDGPlus)內置dUTP/UDG防污染系統,能夠有效降解含有尿嘧啶的PCR產物,防止實驗室氣溶膠污染對實驗結果的干擾。這一特性在病毒檢測和低豐度基因表達分析中尤為重要。操作簡便該試劑盒將逆轉錄和qPCR反應整合在同一管中完成,避免了多次開蓋操作,減少了人為誤差和污染風險。同時,預混液的設計使得實驗操作更加便捷,用戶只需加入引物和模板即可進行反應。示蹤染料輔助試劑盒中的反應緩沖液含有惰性示蹤染料,通過顏色變化(如藍色與黃色混合后變為綠色)直觀判斷樣本是否加入,提高了實驗操作的準確性和可靠性。兼容性該試劑盒適用于多種qPCR儀器,并提供不同濃度的ROX校正染料,以滿足不同儀器的需求。通過工程化改造,如將FnCas12a與單鏈DNA外切酶融合,可以提高基因編輯效率,擴大FnCas12a可以靶向的范圍 。Recombinant Human LEC/CCL16
CRISPR-Cas12a(以前稱為Cpf1)是一種類II型V型內切酶,偏好富含胸腺嘧啶的原間隔短回文重復序列鄰近基序。Recombinant Human LEC/CCL16
SYBR Green qPCR Mix (2×):助力定量PCR實驗實時熒光定量PCR(qPCR)作為一種高效、靈敏的分子生物學技術,廣泛應用于基因表達分析、病原體檢測、基因分型等領域。SYBR Green qPCR Mix (2×) 是一種專為qPCR設計的預混液,憑借其的性能和特點,成為分子生物學研究中的重要工具。產品特點SYBR Green qPCR Mix (2×) 是一種2倍濃縮的預混液,包含qPCR反應所需的所有關鍵組分,如Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、緩沖液、SYBR Green I染料等。這種預混液的設計簡化了實驗操作流程,用戶只需加入模板和引物即可進行反應。其成分SYBR Green I染料能夠特異性結合雙鏈DNA,并在PCR擴增過程中發出熒光信號,熒光強度與DNA擴增產物的量成正比。這種實時監測機制使得qPCR能夠精確地定量分析目標基因的初始拷貝數。產品性能SYBR Green qPCR Mix (2×) 具有高靈敏度和特異性,能夠檢測低拷貝數的DNA模板,適用于多種復雜的樣本類型。其優化的反應體系和熱啟動Taq DNA聚合酶確保了快速、高效的擴增效率,同時減少了非特異性產物的生成。Recombinant Human LEC/CCL16
Probe qPCR Mix (2×, UDG Plus):高效防污染的探針法qPCR解決方案Probe qPCR Mix (2×, UDG Plus) 是一種為探針法實時熒光定量PCR(qPCR)設計的即用型預混液,結合了熱啟動Taq DNA聚合酶、優化的反應緩沖液、dUTP和UDG酶,能夠有效防止PCR產物污染,提高檢測的特異性和準確性。產品特點高特異性和靈敏度:采用抗體修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶,結合優化的反應緩沖液,有效減少非特異性擴增,提高檢測靈敏度。防污染設計:預混液中包含UDG酶和dUTP,可在反應前降解含尿嘧啶的PCR產物,防止氣溶膠污染。多重檢測能力:支持多重qPCR反...