細(xì)胞冷凍的原理：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。無血清凍存液用途：無血清細(xì)胞凍存液用于醫(yī)院樣本庫細(xì)胞樣本保存。廣州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液直銷廠家

細(xì)胞凍存液的原理及配制方法：細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中，及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中，雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是必不可少的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊]有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候，細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，如果沒有原始細(xì)胞的凍存，則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄。太原正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液價(jià)格將分裝好的細(xì)胞凍存管，直接置于-80 度冰箱過夜保存。

無血清細(xì)胞凍存液：凍存注意：開蓋之前，用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身。以下說明適用于在6孔板內(nèi)的培養(yǎng)物的凍存。培養(yǎng)物應(yīng)該在適合傳代的時(shí)候進(jìn)行收集和凍存。每管所含有的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)來源于6孔板的1個(gè)培養(yǎng)孔。如果使用其他的培養(yǎng)器皿，請(qǐng)相應(yīng)的調(diào)整體積。1.在室溫（15-25°C）以300xg離心5分鐘。2.輕輕吸走上清液，注意不要擾動(dòng)細(xì)胞團(tuán)。3.用血清學(xué)吸管以1mL的TBD-698重懸細(xì)胞。在打散細(xì)胞團(tuán)時(shí)，盡量減少細(xì)胞聚集體分解。4.用2mL的血清學(xué)吸管將1mL的細(xì)胞聚集體轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的凍存管中。5.用以下方法凍存細(xì)胞聚集體:推薦使用緩速降溫方法，每分鐘降低1度，隨后可以在-196°C液氮長(zhǎng)期保存。不推薦在-80°C長(zhǎng)期保存。逐步降溫法：-20°C保存2個(gè)小時(shí)，然后-80°C中保存2個(gè)小時(shí)，隨后可以在-196°C液氮中長(zhǎng)期保存。

凍存細(xì)胞注意事項(xiàng)：凍存細(xì)胞系以備將來之用時(shí)，必須遵守以下原則。我們建議您嚴(yán)格遵守您所用細(xì)胞系附帶的操作說明，以便獲得較佳結(jié)果。在細(xì)胞處于生長(zhǎng)期密度達(dá)到70-90%的情況下進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞的凍存，并且細(xì)胞傳代盡可能靠前。確保凍存前活細(xì)胞百分比至少為90%。請(qǐng)注意較佳凍存條件取決于所用細(xì)胞系。細(xì)胞應(yīng)緩慢冷凍，可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器，使溫度每分鐘大約降低1°C。必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO或者甘油等冷凍保護(hù)劑無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：細(xì)胞凍存是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)常規(guī)技術(shù)。

細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè)，去除DMSO，去除死細(xì)胞，這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程，但對(duì)一般人來說，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間，轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少，細(xì)胞就全被扔掉了，轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會(huì)受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜（DMSO），DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇，結(jié)果無有異常。度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細(xì)胞沉淀中。天津無血清細(xì)胞凍存液生產(chǎn)廠家

存細(xì)胞時(shí)需現(xiàn)配凍存液(如購(gòu)買市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液。廣州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液直銷廠家

細(xì)胞凍存的操作步驟：1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；2.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。3.去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來；4.離心1000rpm，5min；5.去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的較終密度為5×106/ml～1×107/ml；6.將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml；7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者；8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。廣州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液直銷廠家