外泌體提取：1、過濾。超濾膜也可用于分離外泌體。根據外泌體的大小，從蛋白質和其他大分子中分離外泌體。較常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體，也有設計成微柱多孔硅纖毛結構以分離40-100nm外泌體：不過，該方法由于過濾膜的粘附，可能會損失外泌體，并且過濾時的壓力和剪切力，可能會使外泌體變形受損。2、基于聚合物的沉淀技術。基于聚合物的沉淀技術通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃溫育并低速離心。用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇（PEG）。用這種聚合物沉淀具有許多優點，包括對分離的外泌體影響小、pH中性等。目前大多數快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法。然而基于聚合物的沉淀方法可能會同時分離非囊泡污染物（包括脂蛋白）而且，聚合物材料的混雜可能會影響下游分析。外泌體提取：在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層。天津外泌體提取試劑報價

研究探討了外泌體是否可以作為RNAi的有效載體的可能性。與脂質體和其他合成藥物納米顆粒載體不同，外泌體含有可能增強內吞作用的跨膜和膜錨定蛋白，從而促進其內容物的遞送。CD47是外泌體蛋白質之一，是一個普遍表達的整合素相關跨膜蛋白，其部分功能可以保護細胞免受吞噬作用。CD47是信號調節蛋白α（SIRPα，也稱為CD172a）的配體，CD47-SIRPα間的結合能夠發出“不要吃我”的信號，從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖，增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用，但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性。研究人員發現，CD47和病基因KRAS驅動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環系統的清理，并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性。所以，外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力，并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期。上海正規外泌體提取試劑推薦廠家外泌體提取：可分離到大小相近的囊泡顆粒。

外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集菌類，現在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發表文章時易受質疑。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產生難以去除的聚合物。

在這項新的研究中，經過基因修飾的外泌體（被稱作iExosome）能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子，從而導致胰腺病模式小鼠病情緩解，增加它們的總存活率。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾（RNAi）的靶向方法：利用這些天然的納米顆粒（即外泌體）運送小干擾RNA（siRNA）或短發夾RNA（shRNA）分子來靶向胰腺病細胞中的KRAS突變基因，從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負荷和存活。他們證實外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發揮作用，這是因為這些納米大小的囊泡（即外泌體）輕松地在體內遷移和進入靶細胞（包括病細胞）中。外泌體是一種能被機體內大多數細胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質雙層膜的微小膜泡。

外泌體的提取方法學規范、統一定量及鑒定等。關于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等，然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法，由于離心步驟繁瑣，費事費力，而且步驟多導致實驗中容易污染，且損耗量大，使得較終回收的外泌體不穩定。而且對于抽提細胞上清來說，更是極為不請便，試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管，無論是過濾還是后續的每一步的離心去沉淀，都具有操作極其不便的缺點，總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔，造成濃縮效率低，濃縮管重復利用差，甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團，造成損失及較后的數據有誤差，對于后續實驗也有影響外泌體的提取方法：密度梯度離心。合肥外泌體提取試劑廠家

外泌體提取的方法：過濾。天津外泌體提取試劑報價

當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合，進而啟動靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合，從而啟動細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。天津外泌體提取試劑報價