鼠尾膠原實驗應用:鼠尾膠原在原代培養耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用。目的:建立利用自制的鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結果:自制的鼠尾膠原能正常地培養出大鼠耳蝸邊緣細胞,細胞角蛋白18表達陽性,免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結論:成功建立了利用自制鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,并且制作簡便,成本低廉。成纖維細胞膠原凝膠復合物有著良好的生物學特性。北京鼠尾膠原產品介紹
酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對分子質量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,其腱性組織被水解成膠凍狀溶液,從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上,可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(,其生物力學強度極差,一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進行SDS-PAGE,結果顯示:Ⅰ型膠原蛋白原液在相對分子質量130000附近有明顯條帶,另一條帶的相對分子質量大于170000(圖2)。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL。吸取礦化液倒入小培養皿中,將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6d后,分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進行TEM和電子衍射觀察。石家莊正規鼠尾膠原推薦廠家制備鼠尾膠原(兩個同學一組操作)。
鼠尾膠原醋酸溶解:1.將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2.建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。3.稀釋一定數量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。
三維膠原的制備:鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A.不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。制備鼠尾膠原:吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克)。
實驗應用:鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細胞培養模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統的研究提供科學有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養法培養人鼻腔纖毛上皮細胞,培養7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態和結構,應用高速攝像技術測量纖毛擺動頻率.結果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接;同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式的成功建立,為今后研究鼻內用藥對纖毛清理功能的影響提供了良好的方法和途徑。它是研究成纖維細胞與細胞外基質之間以及細胞之間相互作用的良好模型。蘇州正規鼠尾膠原銷售廠家
鼠尾膠原蛋白用于生產明膠并添加到布丁和棉花糖中。北京鼠尾膠原產品介紹
鼠尾膠原實驗應用:探討應用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細胞膜片鉗實驗中的促進毛細胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原,觀察全細胞膜片鉗實驗中,自制的鼠尾膠原對前庭毛細胞的貼壁黏附作用。結果無鼠尾膠原時,前庭毛細胞懸浮于外液,不宜封接;有鼠尾膠原時,前庭毛細胞貼附于培養皿底壁,易于封接和長時間(約8h)的觀察和記錄。鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用。結論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。北京鼠尾膠原產品介紹
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鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...