鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入100ul10xPBS或10x培養液,混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。制備鼠尾膠原:將尾腱置于平皿內剪碎,轉移至三角燒瓶中。廈門北京鼠尾膠原
膠原的立體結構與一般的球狀蛋白質完全不同,每一條亞基形成一股左手旋轉的螺旋,其中每3個氨基酸殘基形成一圈螺旋。3條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,這些棒狀分子首尾相連,并側向排列形成膠原微絲(其直徑可從50埃至數千埃)。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區,這些極性區能和重金屬離子結合,使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結構。上海貴陽鼠尾膠原從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。
鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3)在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4)在無菌條件下執行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4.5混合管中的物質并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,混勻,冰上備用。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6)使用時,無菌條件下將溶液加入到細胞培養裝置中37°C凝膠30min。
對于生物科研汪們來說,大白鼠、小白鼠們簡直渾身是寶,從毛發、皮膚,到心肝脾肺,甚至各種排泄物,都是我們重要的研究對象。尾巴,自然也是。所以耗子尾汁不僅存在,甚至是我們生物實驗中必不可少的實驗材料和實驗對象。有不少人靠「耗子尾汁」發了CNS和頂刊。沒有「耗子尾汁」,很多課題可能都沒辦法開展。在以小鼠為模式生物進行科學研究的實驗室中,日常和基本的一個實驗就是提取它們的遺傳物質—DNA(脫氧核糖核酸)進行基因型鑒定,檢測這些小動物的基因組中是否含有特定的DNA。可以理解為給小動物做核酸檢測。整個操作請于冰上進行,因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠。
鼠尾膠原,10mg包裝,配制方法如下:1.配0.1M的乙酸溶液100ml。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,容量瓶配制比較準確。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液(不要用*加,吸十次不如加一次z準確),加入盛膠原的瓶中,輕輕顛倒,不要震蕩,蛋白容易起泡。幾分鐘即可,蛋白質非常好溶解。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中,比青霉素瓶大點的就行。用*在瓶底加1ml氯仿,打到一檔就行,避免加入氣泡。然后4度過夜除菌。4.第二天將上層膠原溶液分裝進EP管中。用封口膜封口,4度保存,勿冷凍。酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料,從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿。合肥正規鼠尾膠原廠家直銷
膠原蛋白(Collagen)是結締組織和內臟部位外基質的主要成分。廈門北京鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適當體積的細胞培養液,轉移到培養箱中培養。注意事項:在室溫下pH中性時可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫。廈門北京鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...