鼠尾膠原膠凝程序:膠原蛋白I按以下步驟使其pH達到堿性時凝膠。1)將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和,把蓋子放在150mm的培養皿上,暫放置一邊。2)將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上,厚度可以根據需要改變,膠原蛋白I(50-100μL)足以涂覆22mm的蓋玻片。對于直徑100mm的培養皿,每個加入約6mL;對于60mm培養皿添加約2.3mL,對于35mm培養皿添加約1mL。3)將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養皿轉移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。4)在無菌蒸餾水中(35mm培養皿加5mL,60mm培養皿加10mL等)浸泡涂布的蓋玻片或培養皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無菌蒸餾水,放置在層流罩中過夜。5)吸出蒸餾水,用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。除了從整條鼠尾中提取的鼠尾膠原蛋白,老鼠的尾巴尖尖也是制備「耗子尾汁」的好材料。無錫開封鼠尾膠原
鼠尾膠原,10mg包裝,配制方法如下:1.配0.1M的乙酸溶液100ml。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,容量瓶配制比較準確。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液(不要用*加,吸十次不如加一次z準確),加入盛膠原的瓶中,輕輕顛倒,不要震蕩,蛋白容易起泡。幾分鐘即可,蛋白質非常好溶解。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中,比青霉素瓶大點的就行。用*在瓶底加1ml氯仿,打到一檔就行,避免加入氣泡。然后4度過夜除菌。4.第二天將上層膠原溶液分裝進EP管中。用封口膜封口,4度保存,勿冷凍。徐州鼠尾膠原哪里買免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。
膠原蛋白分離提純實驗方案:提取鼠尾膠原蛋白的實驗步驟:1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進行酶解,持續一段時間待混合物變成無色、透明、粘稠液體后即可在4℃,5000g的離心力下離心20min,收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液。2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中,持續攪拌直至白色絮狀沉淀從溶液中析出,繼續加入氯化銨直至沉淀不在析出為止,4℃,5000g的離心力下離心20min后獲得白色沉淀。沉淀物加入一定濃度的醋酸溶液中溶解。3、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續反復進行鹽析處理,重復步驟2的過程2~4次。_x005f_x005f_x005f_x000c_鼠尾膠原蛋白經SDS-PAGE蛋白質電泳。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。
鼠尾Ⅰ型膠原:材料與方法:1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司);多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開,去掉皮毛,并剪成小段,抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中,用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,將肌鍵置于平皿中剪碎,按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,將肌鍵分散于醋酸溶液中,4℃放置一周,然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下,肌腱水解成膠凍狀凝膠,置于冰箱4℃保存。鼠尾膠原醋酸溶解:氯仿的量約為膠原溶液的10%。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結)立即混勻。再加入100ul10PBS10培養液,混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。鼠尾膠原蛋白的用途很普遍,可用于化妝品,工業和食品生產等領域。徐州鼠尾膠原哪里買
為了能夠從小鼠身上提取足夠的DNA,要從它們身上取下足量的細胞用于實驗。無錫開封鼠尾膠原
除了讓細胞更好貼上去,鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠,這樣可以在培養皿中一定程度上模擬身體內部的生長環境,讓細胞在更真實地條件下進行生長。當然,除了這些,耗子尾汁還能做到很多事情,只需要打開網站——知網,輸入鼠尾膠原蛋白就能看到,例如鼠尾膠原蛋白可用于制備防皺保濕或美白產品,制作止血海綿敷料等各種用途。NO.3鼠尾DNA除了從整條鼠尾中提取的鼠尾膠原蛋白,老鼠的尾巴尖尖也是制備「耗子尾汁」的好材料。這類「耗子尾汁」通常用來鑒別耗子的基因型,對于轉基因小鼠而言,如果無法通過毛色來分辨動物的基因型,往往會選用經典的PCR法。無錫開封鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...