細胞RNA提取的方法:異丙醇主要用于沉淀RNA。取出EP管后可以見到側壁沉淀,輕輕吸棄上清。向EP管中加入75%酒精洗滌沉淀,幫助分離剩余的有機試劑(剩余有機試劑過多會影響OD值和PCR反應),輕彈沉淀,使其浮在酒精,靜置1-2min,讓酒精充分接觸沉淀,充分溶解有機試劑,然后4度離心5min。輕輕吸棄上清。將EP管再次放于離心機中瞬時離心,棄掉管壁殘余液體。然后將EP管置于超凈臺中干燥5-10min.。注意RNA樣品不要過于干燥,否則很難溶解。加入50ulDEPC處理水,震蕩充分溶解沉淀。測量RNA濃度。將RNA保存于-80度。他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到較低程度。青島RNA提取試劑廠家
總RNA快速提取試劑盒背景資料;EpiQuik?總RNA分離快速試劑盒為從哺乳動物細胞和組織中分離總RNA提供了一種快速、簡單和經濟有效的方法。洗滌劑用于溶解細胞和滅活核糖核酸酶。特殊的高鹽緩沖系統允許蛋白質/DNA被去除,RNA結合到自旋柱的玻璃纖維基質上,同時污染物通過柱。雜質被有效地沖洗掉,純凈的RNA被洗脫。該試劑盒純化的RNA適用于多種常規應用,包括RT-PCR、cDNA合成、northernblotting、差異顯示、引物延伸和mRNA選擇。總RNA快速提取試劑盒描述:本試劑盒包含了直接從培養細胞或組織中成功分離RNA所需的所有試劑。經過裂解、結合和洗滌后,使用特殊設計的柱可以很容易地回收高達10個氧化格的RNA。然后,總RNA準備用于各種下游應用。太原RNA提取試劑產品介紹好的試劑盒價格比較貴,在實驗室可以根據自己的實驗需要來定奪試劑盒的使用。
細菌RNA快速提取試劑盒:該產品基于獨特的裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞RNA酶,然后用乙醇調節結合條件后,總RNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜,再通過一系列快速的去蛋白、漂洗的步驟將細胞代謝物、蛋白等雜質去除,較后低鹽的RNaseFreeH2O將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。該產品可在30min內完成樣品RNA的提取,提取的總RNA完整性好,無蛋白和基因組DNA污染。注意事項:初次使用前請先在漂洗液RW瓶加入指定量無水乙醇,加入后請及時打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入!裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水或者生理鹽水沖洗。所有離心操作步驟,均可在室溫(15-25℃)下進行。提取細菌RNA需先配制加了溶菌酶或者Lysostaphin的TE(10mMTris-HCl,1mMEDTA),TE中已加入溶菌酶或者Lysostaphin,濃度為1mg/mL。
RNA提取濃度不高或質量不佳原因及解決辦法:1、得率過低:提取樣本過低總量不足或者提取樣本過多裂解不徹底;應當使用適當質量的組織或細胞進行提取,樣本前處理一定要做好,裂解應充分。2、基因組殘留:Trizol法提取時,分層后吸取上清時吸到中間層會帶來嚴重的基因組污染;分層吸取時應當格外小心,不要吸取到中間層。如果是采用柱式法提取,可選擇含有DNaseI的試劑盒進行提取,吸附在膜上的核酸直接用DNaseI進行消化,可極大限度的降低DNA殘留。細胞質和細胞核RNA提取試劑盒特點:細胞質RNA不含DNA,直接用于RT-PCR/qRT-PCR。
新型土壤總RNA快速提取試劑盒:獨特裂解劑/裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶,然后RNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于玻璃奶,然后將粗純化的玻璃奶轉移到離心柱,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將腐植酸、細胞代謝物、蛋白等雜質去除,較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。試劑盒特點:離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。兼容性強,適用于各種不同的土壤、糞便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。快速,簡捷,單個樣品操作一般可在1小時內完成。多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達1.9以上,可直接用于PCR,Northern-blot和各種酶切反應植物RNA提取試劑產品特點:用途植物RNA提取試劑可從植物Chemicalbook組織。蕪湖天津RNA提取試劑
植物RNA提取試劑:可從植物組織中快速提取總RNA,可同時處理大量不同樣品。青島RNA提取試劑廠家
細胞RNA提取的方法:實驗提取步驟:標準Trizol提取步驟為液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。將細胞培養皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分鐘,用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進口EP管中。加入1/5體積的氯仿,上下混勻液體,4度靜置10-15分鐘。(氯仿為有機溶劑,有效的使有機相和無機相迅速分離。有機相中主要是酚和蛋白結合,從而使得蛋白和RNA脫離,RNA進入水相)。4度離心15分鐘,一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層,RNA在上清里,從離心機輕輕拿出EP管,以免管內物質震蕩導致下層沉淀激起。吸取上清的時候一定要動作輕柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下層沉淀,將液體置于新的EP管中。加入等體積異丙醇,4度靜置10min,然后12000rpm離心10min。青島RNA提取試劑廠家
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...