細胞轉染的注意事項：細胞狀態這點非常重要，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態再做。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態較好，不要用傳了很多代的細胞去做，細胞的形態都會發生變化。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果?；蛘?，幾種來源于經篩選，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現在有售~在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。唐山細胞高效轉染試劑廠家

細胞電轉染實驗的幾點建議：1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉染實驗非常重要，電場強度不能過高，過高會增加細胞的死亡率；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細胞系具有不同的較佳場強值，實驗前應測定所轉染細胞系的較佳電場強度。2.細胞狀態要好用于電轉的細胞一般選取處于對數生長期的細胞（15代以內，傳代后2d）。因為處于對數生長期的細胞分裂旺盛，表面結構致密比穩定期的細胞差，電轉后，細胞膜的恢復能力強，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA蕪湖北京細胞高效轉染試劑有血清時的轉染 血清一度曾被認為會降低轉染效率。

如何有效提高細胞轉染實驗效率：1.選擇合適的轉染試劑不同細胞系轉染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉染試劑。當然，較適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。2.保持較佳的細胞狀態一般低的細胞代數（<50）能確?；蛐筒蛔儭］^適合轉染的細胞是經過幾次傳代后達到指數生長期的細胞，細胞生長旺盛，較容易轉染。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株，在各實驗室不同培養條件下，其生物學性狀發生不同程度的改變，導致其轉染特性也發生變化。因此，如果發現轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。

細胞轉染：(1)轉染試劑的準備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩，。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘。(4)吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。(5)加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。(6)到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24-48小時?？側旧w重組或基因調控變化等而演化。

細胞轉染效率影響因素：1.細胞密度一般來說，當細胞密度達到60%～80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率，過低或過高都會影響轉染效果。2.細胞生長狀態這點非常關鍵，很多時候傳代次數太少或者太多都將導致細胞對轉染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉染效率以及轉染穩定性、降低細胞毒性，應盡量使用適度傳代的細胞系，并在不同次實驗時保持細胞傳代次數的一致性。3.細胞種類不同細胞種類的細胞在做轉染時所需要的轉染體系是不同的，不能一種體系用在所有類型細胞的轉染實驗通過緩沖液的作用以及脂質與內體膜融合，增大內體的內部滲透壓。深圳細胞高效轉染試劑平均價格

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細胞轉染實驗簡介：實驗材料與器材：1、材料293T細胞、MyoD表達質粒和EGFP表達質粒、DMEM培養基、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液、轉染試劑(TransFast)2、器材20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸、血球計數板、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱、臺式離心機、35mm培養皿、轉染管、15ml離心管、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD。利用脂質體轉染法較重要的就是防止其毒性，因此脂質體與質粒的比例，細胞密度以及轉染的時間長短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉染條件對于效率的提高有巨大的作用。唐山細胞高效轉染試劑廠家