外泌體的提取、分離方法：免疫親和層析法。免疫親和層析法是利用生物體內存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法，主要用于生物大分子的分離、純化。將其應用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體，如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結合，只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別，這使得提取的外泌體純度高，但是產量低。Zarovni等分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法，從血漿和細胞上清中提取外泌體蛋白，結果表明，免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標記蛋白(Alix、CD9、CD63)，同時，ELISA和PCR結果也證明了該方法的可行性。早先應用于從血清等樣本中收集細菌，現在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。天津正規外泌體提取試劑廠家供應

外泌體的提取、分離方法：梯度密度離心法。研究發現，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間，因此，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結合，原理是先除去非囊泡物質，再通過梯度密度濃縮提取外泌體，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統的梯度密度方法通常需要離心16h，但是2012年，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡，因此，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足，污染物質可能和外泌體保持在相同的密度層，特別是這個密度范圍又比較寬。武漢正規外泌體提取試劑廠家推薦外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。

外泌體的提取的方式：1、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。2、PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發表了該方法較新數據，表明PS法可提取相當高純度的外泌體。六是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不普遍。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創診斷。外泌體的提取、分離方法：超高速離心法。

外泌體與肺病預后：外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發現，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發現，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA，其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調，進一步研究發現，let-7f和miR-30e-3p水平可以區分早期和晚期NSCLC患者，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預后密切相關。外泌體提純試劑盒的特色與優勢：無需蛋白酶處理。南京正規外泌體提取試劑廠家直銷

逐漸取代超速離心法并推廣開來。有些試劑盒操作簡便，不用超速離心。天津正規外泌體提取試劑廠家供應

外泌體可通過流式、WB（檢測指標有CD9,CD63,CD81）、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測，普遍應用于藥物載體、疾病診斷marker、精細醫療、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小，樣本含量低，提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等。但到目前為止，仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量、純度以及生物活性。外泌體是細胞間進行物質運輸和信息交流的重要工具，可以通過調節免疫功能促進一些病癥的增殖，血管新生和一些病癥轉移。與細菌傳染，幫助細菌逃避免疫關系很大，并與心血管疾病，老年癡呆等疾病具有密切關系。天津正規外泌體提取試劑廠家供應