一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液;在冰水浴中,調節pH=6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時,去除上清液,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀;2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液,冰水浴中,調節PH=6.5;溶液依次通過陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂進行脫鹽處理;(8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液,-40至-20°C預凍2?4小時,然后真空冷凍干燥,凍干產品經進一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉,滅菌、包裝,得到成品膠原蛋白粉末。整個操作請于冰上進行,因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠。南京正規鼠尾膠原生產廠家
鼠尾膠原蛋白等實驗技術應用:干細胞、血管內皮細胞等多種「難伺候」的細胞,以及一些組織在體外培養時,需要在模擬體內環境的細胞外基質中生長,膠原蛋白和纖粘蛋白正是細胞外基質的主要組成部分,富含1型膠原蛋白大鼠尾部也成了實驗室用膠原蛋白的較主要來源。鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴、在小鼠尾靜脈上劃一道小口、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的。它可以用于監測小鼠血液成分的變化,確認小鼠是否患上了糖尿病或者某些治好能夠改變小鼠的血糖等。比起心臟和眼部取血,實驗用鼠尾尖取血的取血量較小,但取血之后,小鼠還能繼續下一步建模或者實驗,完全沒有性命之憂。廣州正規鼠尾膠原廠家直銷將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。
鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠3種基質對角膜上皮細胞增殖的影響:目的探討鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠3種基質對體外培養角膜上皮細胞增殖的影響。方法采用鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠作為基質包被培養器皿,以普通培養器皿作對照,培養角膜上皮細胞,觀察細胞形態,進行細胞計數并描繪細胞生長曲線,比較不同基質對角膜上皮細胞的增殖作用。結果使用基質包被的培養器皿培養角膜上皮細胞,細胞增殖速度較普通組快,細胞形態、活力和長勢比普通組更佳,促進增殖的能力為鼠尾膠原多聚賴氨酸明膠。結論鼠尾膠原可促進角膜上皮細胞增殖,且增殖效果優于多聚賴氨酸和明膠。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。
鼠尾膠原包被培養板:胎干細胞在體外可誘導分化為血管內皮細胞,進而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細胞來源之一。目的:探討建立定向誘導人胚胎干細胞向血管內皮細胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細胞飼養層上培養人胚胎干細胞H1,將H1細胞團塊轉移到鼠尾膠原包被的培養板,貼壁24-48h后,培養基換為含不同輔助因子和內皮細胞生長添加劑的EGM-2內皮細胞培養基。結果與結論:①在EGM-2內皮細胞培養基誘導下,細胞逐步表達內皮細胞特異性標記基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化細胞表達內皮細胞特異性標記VE-cadherin、CD31。③分化細胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。說明將人胚胎干細胞接種在鼠尾膠原包被培養板上,通過EGM-2內皮培養體系誘導,可直接分化為功能性血管內皮細胞。為研究胞外基質對誘導胚胎干細胞血管內皮細胞分化的作用以及相關信號分子機制打下了基礎。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。I型膠原蛋白(Collagen, Type I)結構上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體。
對于生物科研汪們來說,大白鼠、小白鼠們簡直渾身是寶,從毛發、皮膚,到心肝脾肺,甚至各種排泄物,都是我們重要的研究對象。尾巴,自然也是。所以耗子尾汁不僅存在,甚至是我們生物實驗中必不可少的實驗材料和實驗對象。有不少人靠「耗子尾汁」發了CNS和頂刊。沒有「耗子尾汁」,很多課題可能都沒辦法開展。在以小鼠為模式生物進行科學研究的實驗室中,日常和基本的一個實驗就是提取它們的遺傳物質—DNA(脫氧核糖核酸)進行基因型鑒定,檢測這些小動物的基因組中是否含有特定的DNA。可以理解為給小動物做核酸檢測。膠原蛋白是一種蛋白質,能幫助連接皮膚,骨頭和肌腱等身體組織。廣州正規鼠尾膠原廠家直銷
使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進行酶解。南京正規鼠尾膠原生產廠家
鼠尾膠原膠凝程序:膠原蛋白I按以下步驟使其pH達到堿性時凝膠。1)將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和,把蓋子放在150mm的培養皿上,暫放置一邊。2)將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上,厚度可以根據需要改變,膠原蛋白I(50-100μL)足以涂覆22mm的蓋玻片。對于直徑100mm的培養皿,每個加入約6mL;對于60mm培養皿添加約2.3mL,對于35mm培養皿添加約1mL。3)將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養皿轉移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。4)在無菌蒸餾水中(35mm培養皿加5mL,60mm培養皿加10mL等)浸泡涂布的蓋玻片或培養皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無菌蒸餾水,放置在層流罩中過夜。5)吸出蒸餾水,用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。南京正規鼠尾膠原生產廠家
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...