細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.細胞污染細胞污染也是造成細胞死亡，轉染效率低下的一大原因。首先，轉染細胞用的質粒必須保證無菌。而現在市場上的一般的質粒提取試劑盒都做不到較全無菌。毛博這里再貢獻一個獨門絕招：將提完質粒后或者提的較后一步，用75％乙醇沉淀，這樣就除菌了。2.質粒不行轉染用的質粒首先要保證數量，一般為2μg以上。質粒純度不夠或者含有細菌LPS或其他對細胞有毒害作用的物質，也會影響轉染效率。這個時候，就應該對質粒進行純化和濃縮。震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。深圳細胞高效轉染試劑價格

轉染的注意事項：用于蛋白生產的細胞的轉染可以在添加有血清或無血清培養基中進行。但更傾向于使用無血清培養基表達蛋白，因為血清蛋白會干擾下游表達蛋白的純化。無血清培養基一般針對某一特定細胞類型優化并有幾類無血清培養基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培養基低得多）。無蛋白培養基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化學成分的培養基不含有蛋白或未知組成的成分。多種多樣的配方使您可以選擇較適合您應用的一種。在含血清時轉染的細胞可以適應無血清培養基，無蛋白培養基或限定化學成分的培養基。在部分情況下（如293-F，293-H，COS-7和CHO-S），對于已適應無血清或無蛋白培養基的細胞，可以使用其培養基進行轉染。其他一些無血清培養基包含克制陰離子脂質體介導轉染的成分，在這些情況下，有必要在諸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培養基中進行培養和轉染。開封細胞高效轉染試劑直銷價因為DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大，實驗必須很小心。

影響轉染試驗的因素：細胞狀態變化：（1）轉染試劑與細胞不匹配細胞轉染較適合的不是原代細胞，也不是傳代很多次的細胞。這是因為細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。較適合轉染的細胞是經過幾次傳代后達到對數生長期的細胞，細胞生長旺盛，較容易轉染。（2）把握時機沒錯！轉染也有適當的時機，相比較非分裂細胞——分裂細胞往往要比靜止細胞更易于攝取并表達外源DNA。因此對大多數轉染操作而言，細胞都在轉染當天或前現在種板。同樣重要的是細胞在種板進行轉染時不應處于過度生長的狀態，如細胞數量過多，互相疊加，營養物質耗竭，代謝廢物積聚，轉染率低下也是很正常的！

細胞轉染實驗簡介：實驗材料與器材：1、材料293T細胞、MyoD表達質粒和EGFP表達質粒、DMEM培養基、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液、轉染試劑(TransFast)2、器材20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸、血球計數板、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱、臺式離心機、35mm培養皿、轉染管、15ml離心管、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD。利用脂質體轉染法較重要的就是防止其毒性，因此脂質體與質粒的比例，細胞密度以及轉染的時間長短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉染條件對于效率的提高有巨大的作用。到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液。

細胞轉染的注意事項：轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法：電穿孔法、顯微注射和基因；化學介導方法：如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法：有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是細菌轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。需要指出的一點，無論采用哪種轉染技術，要獲得較優的轉染結果，可能都需要對轉染條件進行優化。影響轉染效率的因素很多，從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長狀態到轉染方法的操作細節。來指示細胞中目標基因是否存在，這樣的報告基因一般可以在轉染后一兩天內檢測到。珠海細胞高效轉染試劑

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轉染的注意事項：培養基中的物品物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養基中細胞的健康生長，使用比含血清培養基更少的物品量。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化，這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。比如，新鮮融化的NIH3T3細胞比傳代8次的細胞表現出更高的轉染效率，融化細胞的進一步傳代并沒有降低轉染效率。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果深圳細胞高效轉染試劑價格