細胞轉染簡介：轉染，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。武漢正規細胞高效轉染試劑直銷廠家

轉染的注意事項：有血清時的轉染血清一度曾被認為會降低轉染效率，但只要在DNA-陽離子脂質體復合物形成時不含血清，在轉染過程中是可以使用血清的。轉染過程在兩步中需要使用培養基做為稀釋液：在DNA-陽離子脂質體復合物準備過程以及復合物同細胞接觸過程。在開始準備DNA和陽離子脂質體試劑稀釋液時要使用無血清的培養基，因為血清會影響復合物的形成。但在復合物形成后，在加入細胞中前可以加入血清。陽離子脂質體和DNA的較佳量在使用血清時會有所不同，因此如果你想在轉染培養基中加入血清需要對條件進行優化。大部分細胞可以在無血清培養基中幾個小時內保持健康。對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用一些營養豐富的無血清培養基，或者在轉染培養基中使用血清。濟南正規細胞高效轉染試劑直銷價細胞易于生長到高密度并合成更多蛋白。

細胞轉染的注意事項：細胞狀態這點非常重要，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態再做。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態較好，不要用傳了很多代的細胞去做，細胞的形態都會發生變化。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。或者，幾種來源于經篩選，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現在有售~

細胞轉染的注意事項：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養基中細胞的健康生長，使用比含血清培養基更少的物品量。其可降解性對體內應用也具有重要的意義。

細胞轉染，你至少要掌握以下幾點：胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用越來越普遍。可分為瞬時轉染，穩定轉染等。瞬時轉染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但通常只持續幾天，多用于啟動子和其他調控元件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72h內分析結果，常常用到一些報告系統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。穩定轉染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，通常需要一些選擇性標記反復篩選得到穩定轉染的同源細胞系。大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細胞分裂而稀釋。南昌細胞高效轉染試劑廠家直銷

脂質體可以和帶負電荷的核酸結合后重新形成復合物。武漢正規細胞高效轉染試劑直銷廠家

影響轉染試驗的因素：1.轉染試劑跟細胞系不匹配轉染試劑跟細胞系也是講究配合默契的，使用同一種試劑，不同細胞系轉染效率通常不同。但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉染試劑。當然，較適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。因為有些細胞系是不穩定的，可能隨著培養時間的改變，培養條件的不同，不同的選擇壓力，可能引起不同的克隆選擇。因此就算是同一個細胞系，在不同條件下轉染能力的差異可能會很大。武漢正規細胞高效轉染試劑直銷廠家