芯棄疾JX-8B數字ELISA產品
每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測
珠子以兩種不同的方式讀出。首先,在與100μMresorufin-阝-D孵育1小時后,用熒光板讀出器以100μL方式讀出珠子結合-半乳糖苷(RGP),一種熒光底物for阝-半乳糖苷酶。在平板閱讀器上,檢測限為15fMofS阝G(圖2)。其次,將珠子加載然后將RGP溶液密封到陣列的孔中,單個酶的信號被允許在反應室中積累,并每30秒獲取一次熒光圖像。實驗結束時獲取陣列的白光圖像以識別含有珠子的孔(含有珠子的孔散射光與空井不同)。熒光圖像用于確定哪些微球具有相關的結合酶(從時間變化的熒光圖像中強度增加)。圖2顯示了微球中含酶的比例與總體S阝G濃度的關系的對數-對數圖。檢測到的比較低酶偶聯物濃度為350飛摩爾(zM),并通過外推信號等于的酶濃度計算得出的檢測限(LOD)。 芯棄疾JX-8B單分子小型化ELISA檢測產品,每個醫學實驗室都能用的單分子檢測;單分子級別數字ELISA特點
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從TNF-α數字ELISA測定的檢測限為~150aM(2.5fg/mL),相當于全血中的~600aM(10fg/mL);市場上可用的ELISA對TNF-α的比較高靈敏度在血清中的LOD為21fM(0.34pg/mL)(補充圖3)。兩種方法的目標蛋白零濃度尖峰均為為這些實驗提供有用的陰性對照:25%的血清含有多種蛋白質的微摩爾濃度,在這些高蛋白質背景之上可以檢測到非常低濃度的目標蛋白。我們還開發了一個證明用于顯示低濃度核酸可以檢測到的DNA的主要數字分析方法,而無需復制目標
單分子免疫檢測數字ELISA高速檢測芯棄疾JX-8B單分子ELISA檢測產品,少至可以進行8孔、4孔的靈活檢測。
芯棄疾JX-8B數字ELISA,每個生物/醫學實驗室都用得起的單分子免疫檢測;
單分子的檢測原理:由Simoa數字免疫分析法實現的超靈敏度已在先前討論過。簡而言之,類似免疫分析中的酶-底物反應是在相對較大的反應體積(50-100μL)中進行的,在信號生成步驟中稀釋了產物分子。信號分子的擴散和稀釋將靈敏度限制在皮摩爾范圍內。相比之下,Simoa通過將單獨標記的免疫復合物和底物限制在飛升大小的孔中,從而限制了熒光產物分子從酶-底物反應中的擴散。當單一酶標簽催化底物轉化為熒光產物時,產生的熒光團被限制在孔中,從而在短時間內產生可測量的熒光信號。
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兩種更多測試的模擬分析信號放大技術是免疫PCR和生物條形碼分析。免疫PCR通過將檢測抗體標記為DNA分子,然后使用PCR進行擴增和定量,從而提高靈敏度。生物條形碼分析利用了與DNA“條形碼”標記的抗分析物納米顆粒,這些納米顆粒在與捕獲在金微粒上的分析物結合后,從納米顆粒上脫雜以進行定量。這兩種方法相對于傳統免疫分析法的靈敏度提高了10到100倍,但尚未整合到所需的全自動系統中,也未用于多重分析。為了比較大限度地加速藥物發現、驗證新型生物標志物并將分子水平診斷引入臨床主流,需要一種具有高效率、高質量數據和成本效益的穩健、多重超靈敏蛋白質檢測技術。芯棄疾JX-8B數字ELISA產品
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人類形式的蛋白質被加入到25%牛血清中以代替臨床測試樣本;通常使用四倍稀釋因子以減少免疫測定中的基質效應4。使用數字ELISA檢測25%血清中的PSA,從該實驗中確定了LOD為~50aM(1.5fg/mL),相當于整個血清中的LOD為~200aM(6fg/mL)。檢測到的比較低濃度為250aM,相當于25%血清中的1fMin全血清。由于LOD是通過外推背景濃度來確定的加上背景的三個標準差,不同運行的LOD取決于背景的CV。在具有典型背景方差的幾個實驗中,全血清PSA的亞飛摩爾LOD得以保持。相比之下,一種前列的商業PSA檢測方法(ADVIACentaur,西門子)報告在人血清中的LOD為3pM(0.1ng/mL),并且已經報道了LOD在10-30fM17,26。 芯棄疾JX-8B單分子小型化ELISA檢測產品,多重檢測,同時測試2-6個檢測項目;芯棄疾產品數字ELISA穩定性
芯棄疾JX-8B簡易版單分子ELISA檢測產品,極速檢測,檢測步驟只需要3次操作,遠遠快于常規ELISA;單分子級別數字ELISA特點
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為了證明檢測極低濃度的可能診斷價值使用數字ELISA檢測血液中的蛋白質,對接受治理性前列腺切除術(RP)的患者血清樣本中的PSA進行了測量。PSA是前列腺病的血清生物標志物病癥既用作篩查工具,也用于監測住院患者的復發接受治理性前列腺切除術28。治理性前列腺切除術后,絕大多數PSA被消除,水平低于標準商用檢測方法的檢測限(3pM或0.1ng/mL)。定期監測這些患者的PSA恢復情況可以檢測前列腺病的復發,但術后幾年內生化復發可能不會被發現。 單分子級別數字ELISA特點