RNA提取:主要試劑Trizol是一種新型總RNA抽提試劑,內含異硫氰酸胍等物質,能迅速破碎細胞,壓制細胞釋放出的核酸酶。1.Trizol試劑含有苯酚,具有毒性和刺激性,注重操作。2.RNase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉,注重配帶手套,樣品盡可能蓋嚴。3.細胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會降低較后得率,因為一部分RNA會殘留在未裂解的細胞中。細胞裂解之后要看不見顆粒狀物質(結締組織和骨除外)。在清洗和裂解細胞時較好在低溫下操作,防止在操作過程中釋放的內源RNase降解了RNA。4.酵母和一些細菌由于細胞壁的特別結構,可以加入Trizol試劑同時加入無RNase的玻璃珠并劇烈振蕩,使細胞裂解充分。2-8℃避光保存一年。RNA提取試劑:TRIpure抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染。南昌正規RNA提取試劑直銷價
提取RNA的詳細步驟:首先,將研缽晾干夠,倒入1/3體積的液氮,加入0.2g均質的植物材料,充分研磨后轉入一個含有300微升GMT的1.5ml的離心管中,搖勻。然后,加入30微升2mol/lNaAc進行搖勻,加入300微升酸酚搖勻,加入100微升的氯仿搖勻。然后,在四攝氏度12000r/min下離心二十分鐘,吸取上清液的3/4,加入等體積的異丙醇,于冰上放置十五分鐘。然后,在四攝氏度12000r/min下離心十分鐘,將沉淀懸浮于含100微升的4mol/lLiCl小試管中,于-20攝氏度下放置過夜。然后,在4攝氏度13000r/min下離心10-15min,將沉淀溶于0.4mlDEPC處理水中,加入1/2體積氯仿和1/2體積酸酚,搖勻,進行抽提,在4攝氏度13000r/min下離心五分鐘。將上清液中加入等體積的氯仿搖勻,進行抽提,在四攝氏度13000r/min下離心五分鐘,上清液中加入1/10體積3mol/lNaAc和兩倍體積的午睡乙醇與-20攝氏度放置一小時。青島RNA提取試劑服務電話在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶 K、溶菌酶等)。
酵母RNA的提取方法:稀堿法是屬化學破壁法,其方法是在一定堿濃度下,使構成細胞壁的蛋白質、脂肪及糖的化合物得到水解,從而破壞細胞壁,此法對堿的濃度及提取溫度要求比較嚴格,堿的濃度不可過濃,應控制在1%,并且對提取溫度也有一定的要求,提取時間短。因為在過分劇烈的條件下,容易使核糖核酸分子內的酯鍵斷裂,使核糖核酸降解而影響收得率。酵母菌作為重要的模式生物,是遺傳學和分子生物學的重要研究材料。由于酵母菌的細胞壁成分復雜,且較原核生物厚,難于破碎,因此酵母菌總RNA的抽提純化要比原核生物總RNA的抽提純化困難的多。如何有效地破碎細胞壁并保證RNA的完整性,是獲得高質量酵母菌總RNA的關鍵問題。總RNA的提取方法還有很多,如Trizol法、異硫氰酸胍法、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法、尿素法、十二烷基硫酸鈉(SDS)法、熱硼酸鹽法等,這些方法各有優缺點,不同的方法適用于不同類型的材料。
環狀RNA是一類產生于RNA剪切過程中的封閉喚醒RNA分子,主要由外顯子和(或)內含子構成。環狀RNA參與了復雜的RNA-RNA的相互作用網絡,在基因轉錄后調控中發揮作用;環狀RNA可直接與蛋白質結合,也可通過RNA介導間接與蛋白質發生關聯,影響蛋白質功能;部分環狀RNA具有翻譯功能。研究發現,環狀RNA與一些疾病的發生、發展具有直接關聯,為一些疾病發病機制提供了新思路,除此之外,環狀RNA在與衰老、炎癥等生理、病理現象方面也有重大應用。純的RNA用RE緩沖液洗脫,不用酚提取或醇沉淀。
RNA提取關鍵點:RNA的產量和質量也是另無數人頭疼的問題,較佳方法是保證樣品完全裂解,但相同的裂解方案換了一個樣本可能就沒轍了。為了提高裂解效果,可以將裂解緩沖液與機械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配,或者在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶K、溶菌酶等)。BIOG血液RNA快速提取試劑盒是公司研發團隊在綜合比較了國外同類較好產品的基礎上反復研制優化而成,專門用于血液RNA的快速提取純化。本試劑盒采用獨特的裂解液配方,可直接從新鮮、冷凍或陳舊的全血中提取高質量的RNA,操作簡便快速,只需15分鐘即可完成血液RNA提取。RNA提取得率較高,可在200μL全血中提取5μg左右RNA。BIOG血液RNA快速提取試劑盒采用了較新的較好離子膜,裂解液和洗脫液經過多次優化,有效地去除了蛋白、色素、脂類等雜質污染,特別適用于血液包括細菌、病菌等傳染的分子檢測。為了使這種酶對降解的影響較小化,較好在采集時就穩定好樣本中的 RNA。長沙RNA提取試劑產品介紹
RNA 的產量和質量也是另無數人頭疼的問題。南昌正規RNA提取試劑直銷價
與DNA不同,RNA一般為單鏈長分子,很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能。RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補配對原則,轉錄而形成的一條單鏈,主要功能是實現遺傳信息在蛋白質上的表達,是遺傳信息向表型轉化過程中的橋梁。在此過程中,轉運RNA是攜帶與三聯體密碼子對應的氨基酸殘基與正在進行翻譯的mRNA結合,而后核糖體RNA將各個氨基酸殘基通過肽鍵連接成肽鏈進而構成蛋白質分子。有些生物,例如一些病菌,也直接使用RNA作為遺傳信息的載體,而不是DNA。南昌正規RNA提取試劑直銷價
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...