外泌體的提取方法學規范、統一定量及鑒定等。關于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等，然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法，由于離心步驟繁瑣，費事費力，而且步驟多導致實驗中容易污染，且損耗量大，使得較終回收的外泌體不穩定。而且對于抽提細胞上清來說，更是極為不請便，試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管，無論是過濾還是后續的每一步的離心去沉淀，都具有操作極其不便的缺點，總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔，造成濃縮效率低，濃縮管重復利用差，甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團，造成損失及較后的數據有誤差，對于后續實驗也有影響。外泌體提取：高速離心沉淀外泌體。上海外泌體提取試劑直銷廠家

外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型，其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換，從而導致大量新生血管的生成，促進了一些病癥的生長與侵襲。功能：當外泌體在1980年初次被發現后，其被認為是細胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發現外泌體具有多種多樣的功能。合肥正規外泌體提取試劑直銷價有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化。

外泌體：該研究主要是做了牡蠣基因組測序，并揭示其應激適應和殼結構的復雜性。其中涉及，所鑒定的259種殼蛋白中的84％不是經典分泌蛋白；它們可能是細胞的一部分或被外泌體沉積而來。259個殼蛋白中的61個與外泌體數據庫中的蛋白質匹配，支持了外泌體的存在。在礦化前緣處觀察到含有方解石晶體的細胞和外泌體樣囊泡，盡管它們在殼形成中的重要性是有爭議的。這項研究為它們在殼內的存在及其可能參與殼形成提供了分子證據。Hedgehog（Hh）蛋白的保守家族作為短距離和長距離分泌的形態發生素，在胚胎發育過程中控制組織構型和分化。成熟的Hh攜帶疏水性棕櫚酸和對其細胞外擴散至關重要的膽固醇修飾。

近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經涉及一些病癥治病領域、醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域；臨床研究上已涉及心血管系統、內分泌代謝系統等。外泌體來源及內含物。幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體，同時外泌體也普遍存在于體液中，包括血液、眼淚、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究發現外泌體中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等）、蛋白、膽固醇等。外泌體的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。外泌體鑒定。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight、WesternBlot、流式細胞術。外泌體表面有其特異性標記物，用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合。

外泌體的提取、分離方法：免疫親和層析法。免疫親和層析法是利用生物體內存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法，主要用于生物大分子的分離、純化。將其應用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體，如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結合，只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別，這使得提取的外泌體純度高，但是產量低。Zarovni等分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法，從血漿和細胞上清中提取外泌體蛋白，結果表明，免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標記蛋白(Alix、CD9、CD63)，同時，ELISA和PCR結果也證明了該方法的可行性。這些試劑盒不需要特殊設備，隨著產品不斷更新換代，提取效率和純化效果逐漸提高。石家莊外泌體提取試劑銷售廠家

如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規化應用的關鍵。上海外泌體提取試劑直銷廠家

用于外泌體提取的體液收集注意事項：1、選擇血清還是血漿？推薦大多數研究選擇血漿。血液凝固過程中血小板會產生大量外泌體，含量占血清中外泌體的50%以上，選擇血漿可避免不必要的影響。2、注意抗凝劑的選擇。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關，這可能是因為肝素與引物和/或酶有競爭作用。除了克制PCR，肝素可以與外泌體結合，阻止細胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達莫（CTAD），CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體。EDTA可能會干擾PCR反應（盡管其程度小于肝素），但是還是優于其他選擇。此外，有研究表明鈣螯合劑可在體外促進外泌體與血小板的結合從而降低經EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數量。使用肝素時這種影響就不會發生，因此建議在測量外泌體的精確數量時選用肝素。但是也有研究表明肝素可以導致體外條件下外泌體的減少。總之，目前尚需要更多的研究論證抗凝劑是否及如何對外泌體的釋放，作用和下游反應產生特異性影響。上海外泌體提取試劑直銷廠家