昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:RNA完整性的電泳檢測:如果需要做Northern雜交,強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳,因為非變性膠不能分離所有的RNA分子。注意:大部分昆蟲的28SRNA被切割成兩個小的片段,彼此用氫鍵相連,所以在甲醛變性膠中,沒有28S帶出現。RNA產量產率測定:將5~10μLRNA溶于TE緩沖液中(pH7.5~8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1OD260的RNA=40μg/mL),進而計算出RNA的產量(濃度X體積)和產率(RNA產量/組織用量)。RNA純度測定:無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8~2.1之間(具體數值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質污染,但一般不影響RT-PCR等反應。所提取的RNA完整性好、純度高,可用于分子生物學后實驗。廣州RNA提取試劑哪家便宜
細胞質和細胞核RNA提取試劑盒特點:1.有效分離和提取細胞質RNA,與細胞核RNA。2.方便快捷的離心柱操作方式。3.提取的RNA,品質高,產量多。4.試劑盒不含苯酚,可提取所有RNA(含MicroRNA)。5.純化的RNA可用于任何應用,包括RT-PCR,qRT-PCR,RNA-Seq,陣列等。6.細胞質RNA不含DNA,可直接用于RT-PCR/qRT-PCR。7.試劑盒可用于哺乳動物細胞或者組織樣品的提取。在某些情況下,研究者們更希望能夠提取特定分餾的RNA,而不是總RNA。例如,在一些表達譜研究中,較好能夠提取成熟的細胞質(Cytoplasmic)RNA。或者,在研究分析未剪接的RNA前體時,提取細胞核(Nuclear)RNA會是一個更好的選擇。然而,市面上絕大多數廠家只能為您分別提供2種試劑盒來提取細胞質與細胞核的RNA,不僅費用高昂,而且浪費大量的材料與時間。廈門RNA提取試劑供應商mRNA是依據DNA序列轉錄而成的蛋白質合成模板。
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒自主研發生產,博取眾家之長,根據多年來市場反饋不斷進行技術升級和改良得來。具有操作步驟少,實驗快捷,RNA產量純度高,充分滿足后續實驗要求的需要,適用提取樣品普遍等特點。產量:每100mg樣品提取的RNA平均值在20-50ug不等。純度:OD值一般在1.9以上。得到的RNA無DNA污染,可直接用于反轉錄,實時熒光定量PCR(尤其對RNA溶液中DNA非常敏感)等所有后續實驗。1、快速:多糖多酚植物RNA提取試劑盒提取RNA的整個實驗操作步驟簡化快捷從時間因素考量上較大限度的防止RNA在提取中的降解(一般樣品十多分鐘就能完一個樣RNA的提取,較大縮短了一般試劑盒提取所需要的半小時甚至更長的時間,)。2、高產量:多糖多酚植物RNA提取試劑盒擁有較強細胞裂解液,保證后續RNA提取的得率。(能完全通過化學方法徹底裂解細胞讓RNA釋放完整,并且有效成分能壓制內源RNA酶的降解作用)。
常用總RNA提取試劑:異硫氰酸胍法和Trizol法是動物組織及動物細胞總RNA提取較常用的方法,異硫氰酸胍法操作簡單快捷,適用于樣本足夠大的常規動物組織;Trizol法裂解能力較強,尤其適合小樣本及特別難提取的組織,如兔子皮膚,動物結締組織等總RNA的提取;另外Trizol作為一種通用型的裂解試劑,還可以用于植物組織、細菌、菌類等組織的提取。對于含多糖多酚的植物組織如油茶、茶葉、油菜等還可以使用CTAB法進行總RNA的提取。提取RNA時我們經常遇到的問題是:(1)RNA產量較低;(2)RNA有嚴重的鹽類污染;(3)RNA有嚴重的有機溶劑污染;(4)樣品降解等問題。普通的提取實驗用國產的試劑盒就足以,價格不高,基本上各地均有現貨。
DNA和RNA的鑒別染色:利用吖啶橙的變色特性可鑒別DNA和RNA。吖啶橙作為一種熒光染料已被用于染色固定,非固定細胞核酸,或作溶酶體的一種標記。觀察死亡細胞熒光變色性變化以及區別分裂細胞和靜止細胞群體。雖然測定DNA和RNA含量時較難獲得好的重復性結果,但該方法已被許多實驗室普遍采用。RNA是核糖核酸,DNA是脫氧核酸。區別:溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇來沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚來沉淀RNA。快速程序在25-40分鐘內提供高質量的總RNA。金華正規RNA提取試劑直銷價
RNA提取試劑注意事項:間層用乙醇沉淀可回收DNA。廣州RNA提取試劑哪家便宜
動物細胞RNA提取:1、懸浮細胞:可直接離心后棄掉培養基,用無菌PBS清洗1~2遍后,再用適量PBS懸浮起來,然后再加入裂解液進行裂解。千萬不要完全棄掉液體后,往沉淀細胞里直接加入裂解液,這樣會使外表層的細胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細胞外側,從而限制沉淀內部的細胞與裂解液的接觸,從而導致細胞裂解不徹底,降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細胞:棄掉培養基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養皿,把細胞吹下來,轉移到無RNA酶的EP管中,加裂解液進行提取。3、貼壁細胞:需要先用胰酶消化,然后收集到無RNA酶的EP管中,離心去其上清,用PBS洗1~2次,去除多余的胰酶,以適量PBS重懸后繼續進行提取步驟。廣州RNA提取試劑哪家便宜
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總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...